反相色譜柱使用維護事項的分享

更新時間：2022-05-27

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液相色譜柱按照其色譜分離模式來分，大致可分為正相、反相、離子交換、疏水作用、體積排除、親和以及手性等類型。其中反相色譜柱是以鍵合非極性基團的載體為填充劑填充而成的色譜柱。

反相色譜柱鍵合相主要包括：C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。對于以上反相色譜柱，我們在使用及維護的時候可以按照同樣的方式：

1、在條件允許情況下，在使用前需要對新色譜柱按照說明書方法進行柱效測試。以確保色譜柱的正常。

2、所有硅膠基質色譜柱使用溫度應低于60℃。

3、樣品

建議將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應含有任何顆粒物，使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用強溶劑（例如，流動相為水，樣品溶劑為甲醇），為達到較好峰形，需要降低進樣量（以250x4.6mm規格為例，小于10μL）。

4、流動相

所有流動相，特別是含有緩沖鹽的流動相，建議當日實驗當日配制；如果使用了前日配制的流動相，請確保流動相pH值沒有變化，并確保流動相沒有長菌。流動相的pH值取決于您的應用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內使用。請盡量避免在常規流動相中使用很高比例的水（>95%）作為流動相，可能會造成保留時間的不穩定或者色譜柱鍵合相的損害。如果使用高比例水或者*水相為流動相，建議使用親水柱，例如Hypersil GOLD aQ、Syncronis aQ、AcclaimPolar Advantage Ⅱ等色譜柱。

5、色譜柱平衡

在進行分析之前，請使用至少20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達到平衡。

色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算：

V=0.68πr2

V為色譜柱柱體積（mL），r為色譜柱內徑（cm），L為色譜柱長度（cm）。

6、色譜柱保護

對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護柱，如果可能，使用SPE小柱對樣品進行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。

7、色譜柱清洗

在儲存色譜柱之前，請使用至少20倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱（去除緩沖鹽），再用更強的溶劑沖洗色譜柱（去除強保留成分，反相色譜通常使用甲醇或乙腈），然后使用合適的溶劑儲存色譜柱。

8、色譜柱保存

反相色譜柱，保存溶劑通常是含至少30% 有機相的水溶液，也可在常規清洗后直接保存在有機相中。

如果需要長時間儲藏，則需要使用較高比例的有機相（有機相比例至少大于50%）